Кошачья лапка растение фото: Кошачья лапка – фото цветов. Растение антеннария двудомная

Содержание

фото, описание, виды и сорта растения, выращивание цветка на участке

Семейство Сложноцветные.

Антеннария (Antennaria) или «кошачья лапка», как ее называют в народе, считается ценным многолетним почвопокровником, помогающим садоводам решать самые разные задачи при оформлении участка. Простое на первый взгляд растение высоко ценится за свою неприхотливость, выносливость, способность выдерживать низкие температуры. Антеннария в любых композициях будет смотреться выигрышно за счет своих мелких, но ярких соцветий и серебристой листвы. Кроме того, данная культура радует длительным цветением и сохранением своей декоративности на протяжении всего года. После цветения куст украшает густая сизо-зеленая с серебристым отливом листва, которая выглядывает из-под снега в зимний период и украшает участок.

Антеннария понравится, прежде всего, начинающим садоводам, а также тем, кто не желает тратить много времени и сил на разведение цветов, но вместе с тем, стремится преобразить участок и сделать его особенным.

В естественных условиях «кошачья лапка» произрастает в умеренных регионах земного шара. Распространена почти во всей Европе и в большей части России.

Описание антеннарии

Согласно ботаническому описанию, антеннария – это многолетнее травянистое растение высотой до 30 см, с лежачими побегами, несущими розетки листьев.

Стебель прямой, неветвистый, вместе с нижней стороной листьев беловойлочный; листья сверху почти голые, зеленые; белые прикорневые – лопатчатые, стеблевые – линейные.

Цветы в мелких корзинках, скученных на верхушке стебля щитком, двудомные. Каждая корзинка снабжена колокольчатой обверткой из черепитчатых листочков, снизу пушистых, наверху сухих, в мужских корзинках они туповатые, короче цветков и обыкновенно белого цвета; в женских – островатые, длиннее цветков и розовые. Женские корзинки с одними нитевидными цветками и летучками из нитевидных волосков; мужские – с трубчатыми, бесплодными цветками и летучками из булавовидно-утолщенных на конце волосков. Тычинок 5; завязь нижняя, одногнездная, с одним столбиком.

Плод – семянка, снабженная летучкой. Растет по сухим местам на лугах и в лесах. Цветет обыкновенно в мае и июне.

Цветет в июле — августе.

Узнать, как выглядит цветок «кошачья лапка», поможет фото, приведенное ниже, на котором хорошо видны его характерные признаки:

      

Виды и сорта травы кошачьей лапки с (фото)

Антеннария двудомная (Antennaria dioica).

   

Растение высотой от 6 до 25 см с тонким корневищем, прямым стеблем и многочисленными лежачими вегетативными побегами. Листья очередно расположенные, светло-зеленые, сверху гладкие, снизу с войлочным опушением. Соцветия небольших размеров, могут быть розовыми или голубыми. Это невысокое растение способно образовывать пышные, раскидистые кусты, которые в период цветения, длящегося с мая по июль, выглядят весьма декоративно. Данный вид является самым популярным среди садоводов.

Сорта антеннарии двудомной:

«Минима» — карликовый сорт высотой не более 5 см, обладает светло-розовыми соцветиями. Образует яркий, пышный ковер в саду;

«Рубра» — куст высотой 15 см, отличающийся красными соцветиями;

«Розеа» — красивый многолетник с темно-розовыми соцветиями и густой зеленью. Считается одним из самых декоративных;

«Априка» — сорт обладает белоснежными мелкими соцветиями, которые очень выигрышно оттеняет серо-зеленая пышная листва;

«Томентоза» — сорт ценится за свою густую, светло-серую, почти белую листву с легким войлочным опушением;

«Roy Davidson» — сорт с лиловыми и розовыми соцветиями и красивыми сизо-зелеными листьями;

«Nvewood» — куст высотой до 10 см с красными цветками.

Антеннария альпийская (Antennaria alpina).

   

Трава «кошачья лапка» данного вида представляет собой многолетнее, низкорослое растение, высотой 10 – 15 см, являющееся почвопокровником, стелящимся по земле и быстро образующим густой плотный ковер. Листья мелкие, овальные, на конце заостренные, серые или сизо-зеленые. Цветки трубчатые, белые, собраны в небольшие кистевидные соцветия. В каждой кисти формируется от 2 до 5 цветков. Цветение начинается в первой половине мая, заканчивается в середине августа.

Антеннария подорожниколистная (Antennaria plantaginifolia).

   

Данный вид «кошачьей лапки» является самым высоким среди других разновидностей антеннарии. Высота взрослых кустов составляет около 40 см. Листья овальные, серо-зеленые, с ярко выраженными прожилками, сформированы в прикорневую розетку. За их сходство с листьями подорожника вид и получил свое название. Поверхность листовых пластин опушена, причем нижняя часть имеет густое опушение, верхняя – слегка шероховатая. Соцветия – мелкие корзинки диаметром не более 1 см. Цветение длится на протяжении 2 месяцев, начинается в разное время, в зависимости от региона. Данный вид обладает повышенной морозостойкостью и способен успешно выдерживать морозы до -40 градусов.

Кроме того, существуют такие виды растения «кошачьей лапки», как обыкновенная, крупнолистная и ворсоносная. Все перечисленные разновидности занимают почетное место на садовых участках, привлекая внимание к своей эффектной, густой листве и ярким соцветиям.

Выращивание антеннарии

Месторасположение. Антеннария светолюбива, но может расти в легкой полутени. Не стоит высаживать ее в тенистых местах сада, поскольку от недостатка солнечного света кусты будут вытягиваться в длину, скудно цвести, а листва потеряет свою яркость. Подойдет для посадки южная, западная и восточная сторона сада.

Почва. Это растение в природе селится на каменистых, обедненных участках, что стоит учесть при разведении данной культуры. Почвы предпочитает песчаные, кислые, рыхлые. Не рекомендуется высаживать «кошачью лапку» в плодородную землю, от этого она начнет сильно ветвиться и вытягиваться, что сделает куст малопривлекательным. Перед посадкой в почву следует добавить речной песок, чтобы она стала более рыхлой. Стоит помнить, что данная культура не терпит присутствия азота и органических удобрений в грунте. Такая особенность антеннарии дает возможность садоводу красиво оформить даже те уголки сада, где не будет расти никакое другое растение.

Полив. Растение засухоустойчивое, в поливах не нуждается, так как ему достаточно естественных осадков. Даже при длительной засухе и сильной жаре «кошачья лапка» будет хорошо себя чувствовать, продолжать цвести и сохранит яркость своей листвы.

Подкормка. Как уже отмечалось, антеннария предпочитает расти на бедных грунтах и негативно отзывается на внесение удобрений. По этой причине от них следует отказаться.

Зимовка. Растение без проблем зимует в открытом грунте, выдерживая низкие температуры.

Проблемы при выращивании. Несмотря на то, что многолетник является одним из самых неприхотливых в выращивании и выносливым, садовод все же сталкивается с определенными проблемами при его разведении. Это связано со способностью антеннарии к стремительному разрастанию. Трава быстро расползается вокруг, заполняя собой все имеющееся поблизости пространство и вытесняя даже сорняки. Если заросли цветка «кошачьей лапки» не омолаживать, через пару лет пышные ковры станут рыхлыми и редкими. Омоложение кустов нужно проводить через каждые 2 – 3 года в весенний период. В процессе данной работы удаляют сухие, отмершие или поврежденные части. Образовавшиеся в «ковре» проплешины заполнить новыми, укоренившимися с прошлого года побегами.

Что касается болезней и вредителей, антеннария устойчива к ним. Иногда куст может поразить паутинный клещ, гусеницы совок или садовая тля. При обнаружении вредных насекомых «кошачью лапку» необходимо обработать инсектицидами.

Размножение антеннарии

Размножение антеннарии проводится семенами, делением кустов и частями ползучих побегов ранней весной или осенью.

Семенной способ является более хлопотным в отличие от остальных. Для посадки готовят небольшие горшочки или пластиковые стаканы и наполняют их смесью, состоящей из почвы, торфа или песка, взятых в равных пропорциях. Данную работу выполняют в марте-апреле.

Емкости с посевами накрывают стеклом, создав, таким образом, мини тепличку. Затем контейнеры переносят в прохладное, светлое место. Тепличку регулярно проветривают, убирая стекло, и следят за высыханием почвы, умеренно увлажняя, но не заливая. Через 2 – 3 недели появятся всходы. Проклюнувшиеся из почвы ростки развиваются очень быстро, поэтому при появлении первой пары листьев их необходимо пикировать в горшки среднего размера. Посадку в открытый грунт на постоянное место производят в июне на расстояние 30 см между саженцами. После посадки молодые растения поливают 2 – 3 раза в неделю до тех пор, пока они полностью не приживутся и не окрепнут.

Вегетативный способ размножения более прост и эффективен. Он помогает получить новое растение в короткие сроки. Цветение можно будет наблюдать в тот же год после посадки. Деление куста можно производить в мае – июне, либо сразу после цветения. Для этого берут крепкие, неповрежденные боковые розетки и высаживают на постоянное место. Для посадки выбирают светлые участки. Сажают на расстоянии 15-20 см.

В апреле можно провести черенкование антеннарии. Сначала следует выбрать здоровый побег и прикопать его к почве. Когда он пустит корни и начнет свое развитие, можно будет отделить его от материнского растения и посадить отдельно.

Как проводится размножение растения «кошачьей лапки» можно увидеть на фото в подборке, предложенной к просмотру ниже:

   

Применение антеннарии в саду

Антеннарию очень часто используют при оформлении садовых участков. С ее помощью декорируют опорные стены, террасы, участки с каменистым грунтом. Применяют ее в альпинариях и рокариях.

Ценят как ковровое растение, способное украсить любую территорию в саду. Ею обсаживают дорожки, заполняют пространство между камнями, рассаживают вдоль дорожек, чтобы придать участку яркий, красочный вид.

В сочетании с другими почвопокровниками антеннарии дают возможность для создания пышных, пестрых ковров, устойчивых к вытаптыванию.

   

Как видно выше на фото, трава «кошачья лапка» благодаря своей способности расти на любых почвах, непригодных для других цветов, помогает садоводу воплотить в жизнь интересные замыслы и задекорировать практически любой участок сада.

Целесообразно также применение многолетника в обычном цветнике, смешанных композициях и на переднем плане.

Лучшими партнерами антеннарий являются злаковые, луковичные культуры, барбарисы, самшиты, астры, хвойные деревья, например, сосны, туи и можжевельники, а также скумпии, кизильник и бирючина.

Кроме того, трава «кошачья лапка» нашла применение в народной медицине. Настои и отвары используют для заживления ран, а также в качестве желчегонного и кровоостанавливающего средства.


Сухоцвет трава (Кошачья лапка двудомная) 10 грамм, цена 119 грн

Кошачья лапка двудомная


Сухоцвет, или бессмертник сердечный (кошачья лапка) обладает коагуляторными (витамин К), желчегонными и седативными свойствами, поэтому широко используется в народной медицине. Правильное применение растения способствует повышению желудочной секреции и налаживанию работы желудочно-кишечного тракта.

 

 

Почему трава сухоцвета так полезна для здоровья


1. Употребляется при холецистите, зубных болях и сильных маточных кровотечениях.
2. Смягчает болезненные ощущения при менструациях, показана при нервных заболеваниях.
3. Подходит для лечения гастритов с нулевой кислотностью и папиломатозе мочевого пузыря.
4. Траву можно заваривать и пить как обычный чай, так как отсутствуют какие-либо токсичные вещества.

 

 

Способы применения травы сухоцвета

 

  • Отвар для приема внутрь — 8 грамм цветочных корзинок заливают кипятком (200 мл), кипятят 5 минут. Отвар настаивают 30 минут, процеживают и пьют по столовой ложке трижды в сутки.
  • Отвар для наружного применения — 16 грамм сырья травы сухоцвета залить 200 мл кипятком и варить 5 минут. Готовую жидкость настаивайте в течение 30 минут, после тщательно процедите и пейте по столовой ложке 3 раза в сутки.
  • Настой — 1 ст. ложка растения заварите кипятком (300 мл), настаивайте в течение 4 часов, процедите и принимайте по 1 ст. ложке через каждые 2-3 часа. При желудочных и кишечных кровотечениях — через 15-30 минут.
  • Настойка — возьмите 1 ст. ложку травы и залейте водкой (100 мл), настаивайте в течение 7 дней в темном и теплом месте (периодически встряхивайте). После процедите и пейте по 25-30 капель (разводить в 150 мл воды) трижды в сутки.

 

 

Почему наша компания так популярна

 

1. Мы даем возможность пациентам лечится длительно и безопасно с помощью натуральных фитопрепаратов.
2. С помощью лекарственных трав вы можете лечить одновременно основное и сопутствующие заболевание.

3. Для приготовления удобной лекарственной формы не требуется специальное оборудование.
4. За счет целебных свойств наших препаратов вы избавитесь от недугов и поднимете иммунитет.
5. Мы установили приемлемые цены для украинских потребителей крупных фармацевтических фирм.
6. Доставляем ваши заказы уже на следующий день после подтверждения заявки, не смотря на объемы партий.

 

Наша команда предоставит европейский сервис с уважением и вниманием к клиенту. С помощью нашего лекарственного сырья и целебных видов чая вы навсегда распрощаетесь с хроническими болезнями, и забудете о сезонных простудах или недомогании.
 Обращайтесь к нам прямо сейчас, позвонив по указанным номерам телефонов. Мы обязательно проведем для вас необходимую консультацию.

Растение Кошачья лапка / Антеннария: Фото, описание

Маленькие соцветия-корзинки с белы­ми, кремовыми, розовыми или красны­ми пленчатыми обертками возвышают­ся над ковром из серебристых листьев с конца весны до начала лета. Эти зимо­стойкие травянистые многолетники -выходцы из Европы, Азии и С. Аме­рики. Они хороши для обрамления дорожек, оформления внутренних дво­риков – патио, но могут быть агрессив­ными в каменистых садах.

Антеннария

Рекомендуемые виды и сорта

A.

aprica

Узкие овальные густоопушенные лис­тья до 4 см длиной образуют серебрис­то-белый ковер. Обертки соцветий-корзинок белые или розово-коричне­вые. Мужские растения окрашены, как правило, ярче. Высота и диаметр расте­ния- 10х60 см.

Узкие овальные густоопушенные лис­тья

“Alex Duguid”

Цветки красновато-розовые;

Цветки красновато-розовые

“Minima” (син. A. Candida)

Карликовый сорт;

Карликовый сорт

“Nyewoods Variety”

Компактные растения с темно-розовы­ми цветками;

Компактные растения с темно-розовы­ми цветками

“Rubra”

Цветки темно-красные;

Цветки темно-красные

Microphylla (син. A. rosea)(К. л. мелколистная)

Густоопушенные лис­тья 2,5 см длиной образуют разрастаю­щийся ковер. Обертки корзинок розо­вые. Высота и диаметр растения -10х60 см.

Густоопушенные лис­тья

Parvifolia (син. A. aprica) (К. л. малолистная).

Листья густо опушены, 2-4 см длиной, образуют серебристо-серые ковры. Соцветия белые, иногда розовые. Высота и диаметр растения 8х30 см.

Листья густо опушены

Выращивание

Растения сажают с конца осени до весны во влажную, хорошо дренированную песчаную почву на солнечном месте.

Размножение

Семена сеют, как толь­ко они созреют осенью или в начале зимы. Весной растения делят.

Вредители и болезни

Обычно не по­ражается.

Поделиться ссылкой:

| Центр водных и инвазионных растений

Обзор видов

Уроженец: Тропическая Америка

Виноградная лоза кошачьего когтя была завезена во Флориду в качестве декоративного элемента незадолго до 1947 года. С тех пор она не выращивалась и из-за своего быстрого роста стала все более распространенной в природных территориях. Кошачий коготь может образовывать плотные коврики, покрывающие лесную подстилку, изменяя местные растительные сообщества.

Виноградная лоза также взбирается на заросли и может задушить местные деревья и кустарники.Лоза кошачьего когтя получила свое название от лазающих придатков, похожих на 3-х зубчатые когти, которые используются для захвата растений или поверхностей.

Характеристики вида

  • Семейство: Bignoniaceae
  • Привычка: Вьющаяся древесная лиана (лиана), которая может вырастать до 50 футов в длину, часто укореняется в узле; стебли покрыты чечевицами; усики раздвоенные, с когтеобразным концом
  • Листья:
    супротивные, сложные, с 2 листочками, которые созревают в листья яйцевидной или ланцетной формы; целые поля; темно-зеленый
  • Цветы: в форме трубы, желтые, 3 дюйма в длину и 4 дюйма в ширину; одиночно или в подмышечных скоплениях
  • Плоды: капсул линейные и плоские, примерно 20 дюймов в длину
  • Семена: продолговатые крылатые семена ветрораспределенные
  • Распространение во Флориде: север, центр и юг, с ограниченным распространением в попугайчике

Этот вид внешне очень похож на местную лозу ( Bignonia capreolata ), но имеет красно-оранжевые цветки. Желтые, воронкообразные цветы кошачьего когтя также напоминают местные джессамины ( Gelsemium spp. ), но их можно отличить по отсутствию у джессаминов усиков и простых листьев.

Удары

Лоза кошачьего когтя – долгоживущее растение, которое растет относительно медленно. На стадии рассады кошачий коготь направляет питательные вещества к своим подземным корням и клубням, а затем быстро удлиняет стебли. Он адаптирован к широкому спектру типов почв, что позволяет создавать любые среды обитания.Районы, подверженные вторжению кошачьего когтя, включают берега рек или ручьев, вблизи жилых домов и нетронутых гамаков. Лоза Кошачьего когтя – одна из самых сложных для борьбы с лозами Флориды. Он восстанавливается из многочисленных сеянцев с клубневыми корнями, которые обычно растут у основания деревьев.

Кошачий коготь – , не рекомендованный UF / IFAS . Согласно оценке UF / IFAS, он имеет высокий риск вторжения во всех частях штата. FLEPPC относит его к инвазивным видам Категории l из-за его способности вторгаться и вытеснять местные растительные сообщества.

Методы борьбы
Профилактические меры

Первым шагом в профилактическом контроле над виноградной лозой кошачьих когтей является недопущение высаживания и удаления каких-либо существующих растений в ландшафте. Если возможно, удаление должно происходить до производства семенных коробочек. Следует проявлять осторожность, чтобы не допустить распространения и рассеивания семян во время процесса удаления. Сообщите общественности, чтобы она воздерживалась от покупки, размножения или посадки лозы кошачьих когтей из-за ее способности ускользать в естественные районы.Местные альтернативы кошачьему когтю включают перекрестную лозу ( Bignonia capreolata ), коралловую жимолость ( Lonicera sempervirens ), желтый жессамин ( Gelsemium sempervirens ) и железнодорожную лозу ( Ipomoea pes-caprae).

Культурный / Физический

Вручную вытащите новые саженцы и обязательно удалите подземный клубень, чтобы избежать повторного прорастания.

Иногда бывает трудно удалить лозу с деревьев, однако эффективна обрезка у основания лозы и удаление связанного с ней клубня.

Механический

Непрерывная стрижка или кошение обеспечат конечный контроль, но этот процесс может занять несколько месяцев или лет, чтобы исчерпать запасы более крупных растений. Во время этого процесса важно предотвратить образование семян.

Биологический

Нет известных средств биологической борьбы с лианой кошачьего когтя.

Химическая промышленность
  • Обрезанный стебель: продукт из 100% глифосата (срезать лозы и покрасить концы глифосатом)
  • Листовая подкормка: 2–3% глифосата, 2% Гарлон 3A
  • Базальная кора: 100% триклопир
  • ** Требуется несколько процедур
Узнайте больше об этом виде

Пурпурная кошачья лапа | U.Служба S. Fish & Wildlife Service

Epioblasma obliquata obliquata

Пурпурная кошачья лапа ( Epioblasma obliquata obliquata ) – одна из самых редких пресноводных мидий, находящаяся на грани исчезновения. Он был занесен в список находящихся под угрозой исчезновения в 1990 году, когда были обнаружены несколько живых взрослых особей, которые были слишком старыми для воспроизводства. В 1994 году геодезисты обнаружили воспроизводящуюся популяцию в Киллбак-Крик, штат Огайо. В настоящее время необходимы дополнительные исследования, чтобы определить, выживают ли какие-либо дополнительные популяции этого вида, а также провести мониторинг известных популяций.Также необходимо провести дополнительные исследования истории жизни.

Связанное содержание

  1. 4 окт.2017 г. | 6 минут читать

Внешний вид

Лапы пурпурной кошки – это мидии среднего размера, примерно прямоугольной формы. Наружная поверхность имела отчетливые линии роста, мелкие волнистые зеленые лучи, гладкую и блестящую поверхность и имела желтовато-зеленый, желтый или коричневатый цвет. Внутренняя часть раковины от блестящего пурпурного до темно-пурпурного.

Пурпурные мидии из кошачьей лапы. Фото Энджи Бойер, USFWS.

Среда обитания

Пурпурная кошачья лапа населяет большие реки с песчано-гравийным грунтом. Встречается в воде от мелкой до умеренной глубины с быстрым течением.

Диета

Пурпурные мидии из кошачьей лапы являются фильтраторами. Они питаются органическим детритом, фитопланктоном и крошечным зоопланктоном.

Исторический диапазон

Алабама, Иллинойс, Индиана, Кентукки, Огайо и Теннесси.

Диапазон тока

Небольшая размножающаяся популяция находилась в Киллбак-Крик, штат Огайо, в 1994 году. В настоящее время пурпурные кошачьи лапы, выпущенные после размножения в неволе, возвращаются в Киллбак-Крик, пока другие участки не будут сочтены подходящими.

Проблемы сохранения

Подобно многим другим пресноводным мидиям, проблемы сохранения возникают из-за промышленного и сельскохозяйственного развития, которое приводит к изменениям в окружающей среде. Мидии являются известным индикатором качества воды и довольно чувствительны к серьезным изменениям. Строительство плотин может не только вызвать изоляцию населения, блокируя пути миграции рыб-хозяев, но также вызвать изменения температуры воды, особенно вокруг основания плотины. Это вызывает более холодную воду, что изменяет естественные биологические таймеры мидий.

Мидии с фиолетовыми кошачьими лапами, помеченные и готовые к отправке в Киллбак-Крик, штат Огайо. Фото USFWS.

Заиление, вызванное такими видами деятельности, как лесозаготовки и добыча полезных ископаемых, увеличивает количество наносов, стекающих в речные системы, захоронение мидий и, в конечном итоге, приводит к удушью.Мидии, особенно молодые или маленькие взрослые мидии, не могут выкопать себя.

Еще одна проблема связана с загрязнением воды, будь то сельскохозяйственные стоки или промышленное загрязнение. Хотя мидии действительно фильтруют речные системы, помогая избавиться от загрязняющих веществ, избыточное количество токсинов приведет к смерти. Загрязняющие вещества, способствующие цветению водорослей, также вредны, поскольку они могут потреблять больше кислорода и препятствовать потоку воды.

План восстановления

Загрузите план восстановления на 1992 год.

Партнерские отношения, исследования и проекты

Центр сохранения моллюсков Департамента рыбных и диких животных Кентукки выращивает фиолетовую кошачью лапу на своем предприятии во Франкфурте, Кентукки. После того, как они выросли в течение нескольких недель, их доставляют в Национальный рыбоводный завод Wolf Creek, где их помещают в садки, построенные специально для разведения мидий. Эти садки помещают в плавучие стеллажи на озере Камберленд, где они будут находиться в течение одного-двух вегетационных сезонов, с апреля по октябрь.Персонал Wolf Creek еженедельно контролирует клетки, счищая лишние водоросли, чтобы обеспечить оптимальный поток корма. Как только молодые особи становятся достаточно большими, их выпускают обратно в их естественную среду обитания.

Как вы можете помочь

  • Защищать водные пути, содержать в чистоте от мусора и других жидких загрязнителей.
  • Волонтерское время в различных организациях, направленных на проекты восстановления среды обитания, например, в программах Kentucky Wild.

Специалисты в предметной области

  • Центр охраны моллюсков Департамента рыбы и дикой природы штата Кентукки

Уведомления Федерального реестра

Следующие документы Федерального реестра были автоматически собраны путем поиска в официальном API Федерального реестра с научным названием этого вида , отсортированным по релевантности .Вы можете провести собственный поиск на сайте Федерального реестра.

  • Сожалеем, но произошла ошибка. Посетите Федеральный регистр, чтобы провести собственный поиск.

Как создать сад, подходящий для кошек – Adventure Cats

Люди сажают сады, чтобы привлечь пчел, птиц и бабочек. Возможно, ваша кошка оценила бы такое же обращение.

Некоторые растения токсичны для кошек, в том числе азалии, хризантемы, нарциссы, гортензии, ирис, плющ, лантана, бархатцы и тигровые лилии.(В ASPCA есть полный список токсичных растений) Но есть много растений и садовых элементов, которые не являются вредными, и кошки могут с удовольствием есть, кататься по ним или бездельничать.

Леонард Перри, профессор садоводства в Университете Вермонта, говорит, что большинство кошек с удовольствием откликнутся на кошачью мяту ( Nepeta cataria ), которую можно выращивать на солнечных участках с хорошо дренированной почвой. Еще одно растение, которое часто вызывает такую ​​же реакцию у кошек, – это кошачья мята ( Nepeta mussinii) , компактное растение, которое также можно выращивать в солнечном месте.

Перри также рекомендует кошачий тимьян ( Teucrium marum), член семейства мятных, выращенных в солнечных местах, которые некоторые кошки предпочитают кошачьей мяте. Ему также нравится валериана ( Valeriana officianalis) , традиционное лекарство от бессонницы или успокаивающее средство для людей, которое является стимулятором для кошек.

Коттедж с восхитительной травой – идеальное место для кошачьих прогулок на свежем воздухе. (Фото: Тинсли Хансдорфер / Общество Одюбона Портленда)

Травы, выращенные из овса, ягод пшеницы, семян ячменя и других злаковых трав, дадут вашим кошкам пищу для еды.Многие кошки также любят жевать паутинные растения.

По словам садовника Кристин ДеМерчант, траву можно даже вырастить на балконе квартиры в старом кошачьем туалете или другом контейнере.

Если вы не выводите кошек в сад на шлейке, DeMerchant предлагает ограждать кошку высоким забором или создать вольер или вольер для кошек на открытом воздухе из сетчатого материала, что известно как катио.

Кошачьи садовники также предлагают включить источник воды, который может быть фонтаном или прудом.Перри говорит, что если вы хотите ловить рыбу в пруду, вы можете установить сетку прямо под поверхностью воды, чтобы кошка не дотянулась до них.

Не забудь беречь этих рыбок от любопытных лап. (Фото: Кристофер Йео / flickr).

Аналогичным образом, если вы хотите позволить своей кошке понаблюдать за птицами, имея кормушку для птиц, убедитесь, что она достаточно высока, чтобы ваша кошка не стала охотником за птицами.

Участок земли, песка или мульчи, в котором можно кататься или копаться, также может быть ценной частью кошачьего сада.Перри говорит, что вы можете положить проволочную сетку под мульчу или компост, если хотите, чтобы кошка не использовала это место в качестве туалетного лотка.

Вы можете создать укрытие с помощью небольшого вигвама из досок или сегмента пластиковой водопропускной трубы, частично заглубленного в землю. Оттенок таких приютов особенно важен, если у вас бледная или белая кошка, которая более восприимчива к солнечным ожогам.

Смотровые площадки можно создать с помощью кошачьей елки или платформ, встроенных в заборы, и они также отлично подходят для поощрения царапин и защиты ваших деревьев. Пни или куски дерева разной высоты также могут быть безопасным местом для кошек, чтобы лазить по ним и осматривать свое окружение. В конце концов, кошки любят лазить, но взбираться на дерево или другой высокий объект на поводке небезопасно.

Кошки также могут захотеть спрятаться в высокой траве. Перри предлагает сеять новые культуры каждые несколько дней, чтобы заменить уже пережеванные. И не забудьте разбить свой кошачий сад подальше от наиболее декоративных частей вашего двора, потому что растения могут пострадать от ваших кошек.

Небольшое лазание – это нормально, но кошкам небезопасно взбираться на высокие предметы на поводке. (Фото: Вера Цобо / iStockphoto)

Техника безопасности при приключениях на заднем дворе
  • Избегайте использования пестицидов в вашем кошачьем саду или сорняков и кормите продуктами, содержащими гербициды. Даже «органические» продукты могут навредить кошкам, если они натянутся на себя и слизывают. Храните химикаты вне досягаемости.
  • Заведите кошек внутрь, когда косите газон. Газонокосилки могут сбивать камни или палки, которые могут ударить ближайшего питомца.
  • И, конечно же, всегда держите кошку на поводке, если она не находится в безопасности в помещении.

Растение тропических лесов Амазонки Uncaria tomentosa (кошачий коготь) и его специфические проантоцианидиновые составляющие являются мощными ингибиторами и редукторами как бляшек, так и клубков головного мозга

Открытие и идентификация

Uncaria tomentosa (кошачий коготь) в качестве мощного ингибитора натурального экстракта растений / разрушитель «бляшек» бета-амилоидного белка

Uncaria tomentosa , также известная как «Uňa de Gato» (по-испански) или кошачий коготь (по-английски), представляет собой древесную лозу, которая медленно растет в тропических лесах Амазонки.Лозу называют «кошачьим когтем» из-за ее характерных когтеобразных шипов, которые выступают из основания ее листьев (рис. 1a, b). Лозе может потребоваться 20 лет, чтобы достичь зрелости, и она может вырасти более чем на 100 футов в длину, когда она прикрепляется и обвивается вокруг местных деревьев. Кора кошачьего когтя собирается для извлечения (рис. 1c) и продается на перуанском рынке в виде связок коры. Он в изобилии встречается в предгорьях тропических лесов Амазонки на высоте от 2000 до 8000 футов.Существует около 34 видов Uncaria , из которых Uncaria tomentosa являются наиболее распространенными видами 33,34 .

Рисунок 1

PTI-00703 кошачий коготь: особый растительный экстракт, полученный из древесной лозы тропического леса амазонки, Uncaria tomentosa (т. Е. Кошачьего когтя). ( a , b ) Uncaria tomentosa (кошачий коготь) с характерными изогнутыми шипами в виде когтей, которые выступают из основания листьев. ( c ) Кора кошачьих когтей используется для экстракции, а связки коры продаются на перуанском рынке. Cognitive Clarity Inc. имеет лицензию на использование в цифровом и печатном виде изображений ( a ) из Getty Images, Чикаго, Иллинойс, США; ( b ) из Amazon-Images MBSI / Alamy Stock Photos; и ( c ) из imageBROKER / Alamy Stock Photo.

В следующем наборе исследований фракционирование под контролем анализов и сложные методы выяснения структуры выявили определенные полифенольные и проантоцианидиновые ингредиенты в кошачьем когте PTI-00703 (т.е. Uncaria tomentosa из определенного перуанского источника), которые обладают естественной способностью уменьшать и подавляют как «бляшки» бета-амилоидного белка, так и «клубки» тау-белка, два признака старения мозга и патологические признаки болезни Альцгеймера.

PTI-00703 кошачий коготь является мощным ингибитором образования фибрилл бета-амилоидного белка (Aβ) 1–40

В одном исследовании Aβ 1–40 инкубировали в отсутствие или в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 в течение 3 дней с анализом аликвот через 0, 1 и 3 дня. Флуорометрия с тиофлавином Т показала, что образование фибрилл Aβ 1-40 происходило в течение 1 дня путем увеличения количества единиц флуоресценции с почти 0 (в день 0) до 3500 единиц флуоресценции в течение 1 дня (рис. 2a). Флуоресценция тиофлавином S фибрилл Aβ 1-40 через 1 день демонстрировала положительную зеленую флуоресценцию при просмотре под флуоресцентным светом, указывающую на образование фибрилл (рис.Это было подтверждено положительным двойным лучепреломлением красный / зеленый после окрашивания конго красным при просмотре в поляризованном свете (не показано). Электронная микроскопия показала большое количество фибрилл Aβ 1-40 к 1 дню с диаметром фибрилл 10-20 нм (рис. 2d). С другой стороны, кошачий коготь PTI-00703 значительно ингибировал образование фибрилл Aβ 1-40, что продемонстрировано дозозависимым снижением флуорометрии тиофлавина Т через 1 и 3 дня (рис. 2a) и заметным снижением флуоресценции тиофлавина S ( Рис. 2c) и окрашивание конго красным (не показано).Электронная микроскопия дополнительно продемонстрировала, что в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 большая часть Aβ 1-40 ингибируется от образования фибрилл и образует только аморфный нефибриллярный Aβ (рис. 2d). Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 заметно ингибирует образование фибрилл Aβ 1-40.

Рисунок 2

PTI-00703 Кошачий коготь является мощным ингибитором образования фибрилл Aβ 1-40. ( a ) PTI-00703 кошачий коготь вызывал дозозависимое ингибирование образования фибрилл Aβ 1-40 по оценке флуорометрии с тиофлавином T.** p <0,05, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента, столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 5. ( b ) Aβ1-40 через 1 день показывает положительную флуоресценцию тиофлавина S (указывающую на амилоидные фибриллы) под флуоресцентным светом. Масштабная линейка = 25 мкм. ( c ) Кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование фибрилл Aβ, о чем свидетельствует заметное снижение флуоресценции тиофлавина S (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 мас. / Мас.). Масштабная линейка = 25 мкм. ( d ) Электронная микроскопия через 1 день показала большое количество амилоидных фибрилл Aβ 1-40 с характерным диаметром фибрилл 10-20 нм. Шкала шкалы = 0,2 мкм. ( e ) Aβ1-40 в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировал образование только аморфного нефибриллярного материала (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 мас. / Мас.). Масштабная шкала = 200 нм.

PTI-00703 кошачий коготь также почти мгновенно разрушает / дезагрегирует предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–42

В другом исследовании дозозависимые эффекты кошачьего когтя PTI-00703 на разрушение / дезагрегацию предварительно сформированного Aβ 1–42 фибрилл. Aβ 1–42 сначала инкубировали при 37 ° C, чтобы наблюдать быстрорастворимые амилоидные фибриллы с помощью флуорометрии с тиофлавином Т в день 0 (рис.3а, день 0), положительное окрашивание конго красным [(т.е. красно-зеленое двулучепреломление, наблюдаемое в поляризованном свете) (рис. 3b) и положительная флуоресценция тиофлавина S (рис. 3d). Aβ 1–42 также демонстрировал амилоидные фибриллы в день 0, как показывает электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием (рис. 3f). В присутствии кошачьего когтя PTI-00703 фибриллы Aβ 1–42 почти мгновенно (в течение нескольких минут после смешивания) дезагрегировались и / или растворялись, о чем свидетельствует заметное снижение флюорометрии тиофлавина T (рис. 3a, день 0, 1). и 3), окрашивание конго красным (рис.3в) и флуоресценции тиофлавина S (рис. 3д). Электронная микроскопия показала, что кошачий коготь PTI-00703 дезагрегировал и восстанавливал предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–42 до в основном аморфного нефибриллярного материала (рис. 3g). Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 также является мощным дезагрегатором / растворителем предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 и, по-видимому, делает это в течение нескольких минут после взаимодействия с фибриллами Aβ 1–42.

Рисунок 3

PTI-00703 Кошачий коготь также практически мгновенно дезагрегировал / разрушал фибриллы Aβ 1–42.( a ) PTI-00703 кошачий коготь вызывал дозозависимое разрушение / дезагрегацию фибрилл Aβ 1–42 по оценке флуорометрии с тиофлавином T. Дозозависимое дезагрегация / разрушение фибрилл Aβ 1–42 наблюдали почти сразу (после смешивания). ** p <0,05, *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 5. ( b ) Окрашивание конго красным фибрилл Aβ 1–42 к дню 0 продемонстрировало устойчивое красное / зеленое двойное лучепреломление в поляризованном свете, указывающее на амилоидные фибриллы.Масштабная линейка = 25 мкм. ( c ) Aβ1–42 в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 почти полностью ослаблено окрашивание конго красным, что указывает на разрушение / дезагрегацию фибрилл Aβ 1–42 (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 мас. / Мас.) . Масштабная линейка = 25 мкм. ( d ) Aβ 1–42 к 0 дню также показал положительную флуоресценцию тиофлавина S под флуоресцентным светом. Масштабная линейка = 25 мкм. ( e ) PTI-00703 кошачий коготь дезагрегировал / разрушил фибриллы Aβ 1–42, о чем свидетельствует заметное снижение флуоресценции тиофлавина S (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 мас. / Мас.).Масштабная линейка = 25 мкм. ( f ) Электронная микроскопия в день 0 продемонстрировала обильные амилоидные фибриллы Aβ 1–42 с характерным диаметром фибрилл 10-20 нм. Масштабная шкала = 100 нм ( г, ) Фибриллы Aβ 1–42 в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировали в основном образование аморфного нефибриллярного материала почти сразу после смешивания (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 вес / вес). Масштабная шкала = 100 нм.

PTI-00703 кошачий коготь также является мощным ингибитором / разрушителем «клубков», что продемонстрировано

анализами in vitro

Домен с 4-мя повторами тау-белка человека (образованный как рекомбинантный белок в человеческом E.coli ), который перекрывается с аминокислотами Q244-E372 тау-441, был экспрессирован в E. coli (фиг. 4a, b). Он образовывал парные спиральные филаменты в присутствии гепарина, идентичные спаренным спиральным филаментам головного мозга в «клубках», как показывает электронная микроскопия (рис. 4c, d). Домен с 4 повторами тау и полноразмерный белок тау использовали для определения того, является ли кошачий коготь PTI-00703 также ингибитором / восстановителем парных спиральных филаментов белка тау. В одном анализе анализ связывания тиофлавина S определял эффекты кошачьего когтя PTI-00703 на ингибирование образования филаментов / фибрилл тау-белка.Как показано на фиг. 4e, кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование филаментов / фибрилл тау-белка с IC 50 , равным 29 мкг / мл, с соотношением PTI-00703 кошачий коготь: белок тау ~ 0,2: 1. Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 может препятствовать образованию тау-белка парных спиральных нитей / тау-фибрилл.

Рисунок 4

PTI-00703 Кошачий коготь также ингибировал клубки тау-белка и образование филаментов, а также уменьшал количество предварительно сформированных тау-фибрилл. ( a ) Изоформы белка тау и очищенный домен с 4-мя повторами тау.Диаграмма шести изоформ тау, выровненных с «новым» доменом с 4 повторами тау, который был сгенерирован (верхняя часть изображения). (b ) SDS-PAGE и окрашивание серебром показали очищенный белок домена с 4-мя повторами тау-белка при ~ 15 кДа (250 нг загруженного белка). ( c , d ) Электронная микроскопия показала парные спиральные филаменты (т.е. клубки), образованные из , агрегированного домена с 4-мя повторами тау-белка in vitro (10 мкМ) в присутствии гепарина. Масштабные полосы = 50 нм. ( e ) Ингибирование образования фибрилл тау-белка кошачьим когтем PTI-00703 с использованием анализа связывания тиофлавина S.n = 4. ( f ) Кошачий коготь PTI-00703 также разрушал / дезагрегировал предварительно сформированные филаменты и фибриллы тау-белка с использованием анализа связывания тиофлавина S. n = 4 ( г ) Кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование фибрилл тау-белка дозозависимым образом, как было определено с помощью спектроскопии КД. Один только тау-белок (черная полоса) показал характерные спектры КД с бета-слоями с минимумом на длине волны 218 нм. Повышение концентраций кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировало дозозависимое снижение вторичного сворачивания бета-листов тау-белка, как показано дозозависимым сглаживанием минимумов 218 нм. n = 3. ( ч ) Кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование фибрилл тау-белка дозозависимым образом, как показано на EM. Повышение концентрации кошачьего когтя PTI-00703 (т.е. 10 мкг / мл, 50 мкг / мл и 200 мкг / мл) продемонстрировало уменьшение и дезагрегацию филаментов и фибрилл тау-белка на преимущественно аморфный нефибриллярный материал. Масштабные полосы = 200 нм.

В другом исследовании кошачий коготь PTI-00703 также разрушил / уменьшил предварительно сформированные филаменты / фибриллы тау-белка, что было определено с помощью анализа связывания тиофлавина S.IC 50 кошачьего когтя PTI-00703 в этом исследовании составляла 16 мкг / мл с соотношением белка PTI-00703 кошачий коготь: тау-белок ~ 0,11: 1 (рис. 4f). Спектроскопия кругового дихроизма (КД) дополнительно продемонстрировала, что через 24 часа тау-белок в присутствии гепарина сформировал подтверждение вторичного сворачивания β-слоя (что свидетельствует о филаментах / фибриллах тау-белка) с минимумом при 218 нм (рис. 4g, только тау-белок). . Инкубация тау-протеина + гепарина с увеличивающимися концентрациями кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировала дозозависимое снижение образования β-листов тау-протеина, наблюдаемое по сглаживанию кривой при 218 нм, показанной с помощью КД-спектроскопии (рис.4г). Это продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 вызывает разрушение клубков тау-белка за счет уменьшения вторичного сворачивания β-листов клубков тау-белка.

Электронная микроскопия (рис. 4h) подтвердила данные, полученные другими методами, как описано выше. Обильные тау-филаменты / фибриллы наблюдали с помощью ЭМ в течение 3 дней инкубации при 37 ° C (фиг. 4h, контроль). В присутствии возрастающих концентраций кошачьего когтя PTI-00703 все меньше и меньше филаментов / фибрилл тау-белка образовывалось в течение 3-дневного периода совместной инкубации (рис.4 ч, 50 мкг / мл). При наивысшей испытанной концентрации кошачий коготь PTI-00703 полностью подавлял образование филаментов и фибрилл тау-белка (рис. 4h, 200 мкг / мл). Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 также эффективен как ингибитор и разрушитель тау-клубков (то есть парных спиральных нитей). Таким образом, кошачий коготь PTI-00703 был идентифицирован как естественный ингибитор и восстановитель как фибрилл Aβ, так и филаментов / фибрилл тау-белка.

Первоначальное выделение и тестирование активных ингредиентов внутри кошачьего когтя PTI-00703, ответственных за ингибирование и снижение активности фибрилл Aβ

Аффинное фракционирование на основе анализа и жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ), выделение и очистка основного ингибитора и восстановления фибрилл Aβ активные компоненты присутствуют в кошачьем когте PTI-00703.Аликвоты из фракций 1–22 (т. Е. От 4 до 84 минут) инкубировали с предварительно сформированными фибриллами Aβ 1–40 (в течение 3 дней) (рис. 5) или фибриллами Aβ 1–42 (образующиеся мгновенно) в течение 2 часов (при соотношение вес / вес 1: 1) и протестированы на их способность восстанавливать / разбирать предварительно сформированные фибриллы Aβ с использованием флуорометрического анализа с тиофлавином Т, как описано ранее 35 . Как показано на фиг. 5, только фибриллярный Aβ 1-40 продемонстрировал флуоресценцию 836 +/- 61 флуоресцентных единиц. Фракции 13–18 (т.е. 52–72 минуты) продемонстрировали наибольшую способность (от 60–75%) восстанавливать / разбирать предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–40, на что указывает заметное снижение единиц флуоресценции (рис.5). Аналогичные результаты были получены с предварительно сформированными фибриллами Aβ 1–42 (не показаны). Это исследование показало, что наиболее активные компоненты, ингибирующие амилоидные фибриллы Aβ в кошачьем когте PTI-00703 ( Uncaria, tomentosa), находятся во фракциях 13–18.

Фигура 5

Флуорометрический анализ тиофлавина Т выявил водорастворимые фракции кошачьего когтя ( Uncaria tomentosa ), которые обладали активностью по уменьшению / дезагрегации фибрилл Aβ. Фракции 13–18 (52–72 минуты) содержат компоненты, которые уменьшают / растворяют предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–40 на 60–75%. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4.

Очистка основных компонентов, ингибирующих амилоид Aβ, в водорастворимой фракции

Uncaria tomentosa (протокол выделения PTI-777)

Для выделения PTI-777 была использована методика, изложенная в таблице 1. В этих условиях PTI-777 разделен на 11–13 основных компонентов (рис. 6a), как показывает УФ / видимое детектирование (диодная матрица). Эти фракции были собраны и обозначены следующим образом: фракция g (13–14 минут), фракция f (15–16 минут), фракция h (17–20 минут), фракция i (21 минута), фракция j (22–23 минуты). ), фракция k1 (24 минуты), фракция k2 (25 минут), фракция l (26–27 минут), фракция m (27–28 минут) и фракция n (28–29 минут) (рис.6а).

Таблица 1 Протокол изоляции PTI-777. Пошаговый протокол выделения для выделения и идентификации ингредиентов, ингибирующих / восстанавливающих амилоидные фибриллы Aβ, в кошачьем когте PTI-00703 ( Uncaria tomentosa ), как показано на фиг. 6a. Фиг. 6 Профиль

PTI-777 (основные ингредиенты, ингибирующие Aβ в кошачьем когте PTI-00703). ( a ) Профиль препаративной ВЭЖХ PTI-777, который продемонстрировал основные водорастворимые компоненты, ингибирующие Aβ, выделенные из Uncaria tomentosa (кошачий коготь), отмеченные (слева направо) как фракции g, f, h, i, j, k 1 , k 2 , l, m / n и o.( b ) Идентификацию каждой фракции с использованием различных методов, включая PTI-00703 кошачий коготь, PTI-777 и отдельные фракции PTI-777, оценивали с помощью флуорометрии с тиофлавином T. Кошачий коготь PTI-00703, PTI-777 и отдельные фракции f-n были значительными эффективными разрушителями / восстановителями фибрилл Aβ 1-42. С другой стороны, алкалоиды кошачьего когтя изоптероподин, птероподин, изоматрафилин и митрафиллин не оказали значительного влияния на дезагрегацию / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42.Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. п = 5.

In vitro тестирование отдельных фракций в составе PTI-777 на ингибирующую / снижающую активность амилоидных фибрилл Aβ

Биоактивность PTI-777 и его отдельных отдельных фракций (т.е. фракций с f по o) оценивали в ряде различных in vitro. проб. Тестирование включало использование флуорометрии тиофлавина Т, тестов окрашивания конго красным и отрицательного окрашивания EM. В большинстве экспериментов отдельные выделенные фракции PTI-777 напрямую сравнивались с (PTI-00703 кошачий коготь, PTI-777 и основные оксиндольные алкалоиды, выделенные из Uncaria tomentosa и предположительно обладающие важной биологической активностью, как описано в 2 патентах США 36). , 37 (рис.6б).

В одной серии исследований флуорометрия тиофлавина Т сравнивала способность кошачьего когтя PTI-00703, PTI-777 (основные компоненты кошачьего когтя), отдельных фракций PTI-777 (включая фракции f, g, h, j, k, l, m и n) и алкалоиды, выделенные из Uncaria tomentosa (включая изоптероподин, птероподин, изомитрафиллин и митрафиллин), для разрушения / восстановления предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. Результаты 5 различных экспериментов по флуорометрии с тиофлавином Т показали, что кошачий коготь PTI-00703 вызывал значительную (p <0.001) 53 +/- 2,5% разрушение / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 (рис. 6b). С другой стороны, отдельные фракции PTI-777, включая фракцию f (64,0 +/- 1,7% ингибирования), фракцию g (62,3 +/- 8,5% ингибирования), фракцию h (которая состояла из h2 и h3; 56,3 +/- 2,1%), фракция j (68,7 +/- 2,0%), фракция k (которая состояла из k1 и k2; 58,0 +/- 4,6% ингибирования), фракция l (68,3 +/- 2,3% ингибирования), фракция m ( 64,0 +/- 1,5% ингибирования) и фракция n (63,0 +/- 1,0% ингибирования) были одинаково достаточно эффективны в отношении значительного разрушения / уменьшения предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-42.Удивительно, но оксиндольные алкалоиды (изоптероподин, птероподин, изомитрафиллин и митрафиллин) не оказали значительного влияния на разрушение / дезагрегацию предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-42 (рис. 6b). Это исследование также показало, что PTI-777 (т. е. фракции от f до o) был значительно более эффективным разрушителем Aβ из 1-42 фибрилл (т.е. 87,3 +/- 3,0%), чем любая из отдельных тестируемых фракций. Эти исследования показали, что PTI-777 и его отдельные фракции (фракции f, g, h, j, k, l, m и n) были эффективными дезагрегаторами и восстановителями фибрилл Aβ 1–42.Кроме того, было очевидно, что комбинация фракций, наблюдаемая с PTI-777 (смесь ~ 11-13 основных компонентов), была даже более активной, чем любая из отдельных фракций PTI-777 по отдельности, что предполагает возможный синергетический эффект между различными Комплектующие ПТИ-777. Наконец, тот факт, что изолированные алкалоиды из Uncaria tomentosa были в основном неэффективными в разрушении фибрилл Aβ 1-42, предполагает, что оксиндольные алкалоиды не ответственны за ингибирующие эффекты амилоида Aβ, оказываемые PTI-777, отдельными фракциями PTI-777. протестировано выше, или кошачий коготь PTI-00703.

В другом исследовании, флуорометрия с тиофлавином Т определила дозозависимую эффективность PTI-777 (т. е. компонентов, ингибирующих амилоид Aβ, присутствующих в кошачьем когте PTI-00703) в разрушении / восстановлении предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. Например, PTI-777 при соотношении масс / масс Aβ: PTI-777 1: 0,1 значительно (p <0,001) снижает количество фибрилл Aβ 1-42 на 73,2%; тогда как при соотношении Aβ: PTI-777 вес / вес / 1: 1 значительно (p <0,001) снижалось количество фибрилл Aβ 1-42 на 98,6% (фиг. 7a).

Рисунок 7

PTI-777 разрушает фибриллы Aβ 1–42.( a ) Дозозависимое разрушение / дезагрегация фибрилл Aβ 1–42 под действием PTI-777 по данным флуорометрии с тиофлавином T. PTI-777 значительно (p <0,001) разрушал / дезагрегировал фибриллы Aβ 1–42 дозозависимым образом. ** p <0,01, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4. ( b ) Дозозависимое ингибирование связывания Конго красного с фибриллами Aβ 1–42 с помощью PTI-777. *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4. ( c – f ) PTI-777 вызывал заметное разрушение / дезагрегацию вторичной структуры β-слоя для фибрилл Aβ 1–42 и предотвращал образование фибрилл Aβ 1–40, как было определено с помощью спектроскопии КД.( c ) PTI-777 через 3 дня вызывал уменьшение β-слоя фибрилл Aβ 1–42 при соотношении PTI-777: Aβ 1–42 (вес / вес) 0,1: 1, как показано уменьшением на кривой минимумов ~ 218 нм. ( d ) Через 7 дней совместной инкубации PTI-777 вызвал еще большее разрушение вторичной структуры β-слоя в фибриллах Aβ 1-42. ( e ) PTI-777 через 3 дня полностью предотвращал образование фибрилл Aβ 1-40, что продемонстрировано полным сглаживанием характерных минимумов β-листов, наблюдаемых только для фибрилл Aβ 1-40.( f ) Подобное ингибирование образования β-листов Aβ 1-40 наблюдалось с PTI-777 через 7 дней.

Анализ связывания Конго красного продемонстрировал аналогичные результаты. Как показано на фиг. 7b, PTI-777 эффективно восстанавливает предварительно сформированные фибриллы Aβ 1-42 дозозависимым образом. Например, PTI-777 значительно (p <0,001) снижает количество фибрилл Aβ 1–42 на 54,5% при соотношении PTI-777: Aβ 1–42 по массе 1: 0,1: и на 71,3% (p <0,001). при соотношении масс / масс PTI-777: Aβ 1: 1. Уменьшение окрашивания конго красным на предметных стеклах также продемонстрировало заметное уменьшение двойного лучепреломления красный / зеленый (не показано), что свидетельствует о том, что PTI-777 значительно разрушает предварительно сформированные фибриллы Aβ -42.

Спектроскопия кругового дихроизма (CD) подтвердила, что PTI-777 (то есть компоненты, ингибирующие амилоид Aβ, присутствующие в кошачьем когте PTI-00703) не только ингибирует образование фибрилл Aβ 1-40, но также нарушает / снижает вторичное сворачивание β-складок Aβ. 1–42 фибриллы. В одном исследовании 50 мкМ предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 инкубировали с PTI-777 при соотношении PTI-777: Aβ 1–42 по массе 0,1: 1. Как показано на рис. 7c, Aβ 1–42 (красные закрашенные кружки) через 3 и 7 дней продемонстрировал характерный образец протяженной вторичной структуры β-листов, как показано кривой и минимумом при ~ 218 нм. В присутствии PTI-777 (синие закрашенные кружки) как через 3 дня (фиг. 7c), так и через 7 дней (фиг. 7d) наблюдалось заметное разрушение / уменьшение предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-42. Через 7 дней наблюдалось примерно 85–90% разрушения / уменьшения вторичной складки β-складчатого листа под действием PTI-777, как показано сглаживанием / сглаживанием кривой, особенно при длине волны ~ 218 нм (рис. 7d).

В другом исследовании 50 мкМ Aβ 1-40 инкубировали при 37 ° C в течение 1 недели в фосфатно-солевом буфере (pH 7,4) либо отдельно, либо в присутствии PTI-777 на PTI-777: Aβ 1– Отношение 40 мас. / Мас. 0.1: 1. PTI-777 вызывал полное снижение кривой вторичного сворачивания β-листов (т.е. минимумы при 218 нм) в течение 3 дней совместной инкубации с Aβ 1-40 (рис. 7e, синие закрашенные кружки). Подобное ингибирование образования фибрилл Aβ 1-40 с помощью PTI-777 наблюдали через 7 дней инкубации (рис. 7f, синие темные кружки).

Заметное снижение нагрузки на амилоидные бляшки головного мозга с помощью PTI-777 (основные ингредиенты, ингибирующие амилоид Aβ кошачьего когтя PTI-00703) в модели трансгенной мыши с болезнью Альцгеймера

В следующей серии исследований мы определили, может ли PTI-777 оказывают прямое влияние на нагрузку на амилоидные бляшки головного мозга при прямом введении в кору 8-месячных двойных трансгенных мышей TASD-41 APP (i. е. Лондонские и шведские мутации под промотором Thy-1) 38 . Как показано на фиг. 8а, показаны репрезентативные окрашенные серебром по Бельховски срезы гиппокампа и коры головного мозга 8-месячных трансгенных мышей, продуцирующих бляшки. Наблюдались многочисленные амилоидные бляшки (белые стрелки). После 14-дневного лечения PTI-777 наблюдалось заметное уменьшение количества амилоидных бляшек в гиппокампе и коре головного мозга, при этом оставалось лишь несколько бляшек (фиг. 8b, стрелки). Количественное определение% нагрузки амилоида Aβ и количества бляшек (на квадратный мм) показало, что инфузия PTI-777 значительно (p <0.01) снизил% нагрузки Aβ на 59% и количество бляшек (p <0,001) на 78% только после 14 дней лечения PTI-777 (фиг. 8c). Место инфузии не было видно на этих микрофотографиях, что указывает на то, что лечение PTI-777 было эффективным для всего мозга, даже относительно далеко от места инфузии.

Фигура 8

PTI-777 заметно уменьшил количество амилоидных бляшек в головном мозге 8-месячных трансгенных мышей TASD-41 APP после прямой инфузии в гиппокамп. ( a ) Окрашивание серебром по Бельховскому показывает обильные амилоидные бляшки в гиппокампе и коре головного мозга трансгенных мышей TASD-41 APP, которым вводили физиологический раствор в течение 14 дней.Масштабная линейка = 100 мкм. ( b ) Обработка PTI-777 (100 мкл при 8 мг / мл; 14-дневная инфузия) продемонстрировала заметное уменьшение амилоидных бляшек (стрелки) у 8-месячных трансгенных мышей TASD-41 APP. Масштабная линейка = 100 мкм. ( c, d ) Заметное снижение% нагрузки бета-амилоидным белком и количества бляшек (на квадратный мм) после инфузии PTI-777. ** p <0,01; *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4.

PTI-777 пересекает гематоэнцефалический барьер и попадает в паренхиму мозга в течение 2 минут после того, как находится в крови

Профиль ВЭЖХ немеченого PTI-777 показан на рис.9a, который был почти идентичен профилю ВЭЖХ 3 H-PTI-777 (фиг. 9b), что указывает на то, что радиоактивное мечение тритием мало изменило структуру PTI-777. Распределение радиоактивности, измеренное во фракциях 0,5 мл, которые были элюированы из колонки для ВЭЖХ и собраны, начиная с 16,5 минут, показано на фиг. 9c. Последний рисунок демонстрирует, что пики ВЭЖХ PTI-777 также обладают наибольшей радиоактивностью. Для определения потенциальной способности 3 H-PTI-777 преодолевать гематоэнцефалический барьер и проникать в ткань мозга самцам и самкам крыс Sprague-Dawley вводили один i.v. впрыск 3 H-PTI-777. Затем по два животных в группе умерщвляли через 2, 5, 10, 20 минут, 1, 6 и 24 часа после введения и определяли количество 3 H-PTI-777 в ткани мозга. Как показано на фиг. 9d, ~ 18000 ударов в минуту / г ткани 3 H-PTI-777 в головном мозге было обнаружено в течение 5 минут после внутривенного введения. К 1 часу это снизилось до ~ 10 100 ударов в минуту / г. Даже через 24 часа в ткани головного мозга все еще содержалось около 7000 ударов в минуту / грамм 3 H-PTI-777, что указывает на то, что ~ 41% начальной дозы, попавшей в паренхиму головного мозга, оставалось в ткани мозга даже в течение 24 часов. -часовой период.

Фигура 9

3 H-PTI-777 пересек гематоэнцефалический барьер и проник в паренхиму мозга в течение 2 минут после периферического введения. 0,9 мКи 3 H-PTI-777 с удельной активностью 1,25 мКи / мг (в концентрации 1 мКи / мл) получали и использовали для исследований на животных. ( a ) На рисунке показан профиль ВЭЖХ немеченого PTI-777, который почти идентичен профилю ВЭЖХ ( b ) 3 H-PTI-777. Показаны дроби g, f, h, i, j, k и m / n.( c ) Распределение радиоактивности, измеренное во фракциях по 0,5 мл, которые были элюированы из колонки для ВЭЖХ и собраны, начиная с 16,5 минут. Этот график демонстрирует, что пики ВЭЖХ PTI-777 также совпадают с наибольшей радиоактивностью. ( d ) Проникновение 3 H-PTI-777 в мозг крысы с радиоактивностью, присутствующей в ткани мозга, в течение 2 минут и продолжалось в течение 24-часового периода. n = 14 (7 самок и 7 самцов крыс Sprague-Dawley) ( и ). Проникновение 3 H-PTI-777 в ткань мозга мыши (мыши CD-1) в течение 2 минут после попадания в кровь.n = 16. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM.

В другом исследовании группам мышей CD-1 (n = 4 на группу) внутривенно вводили 3 H-PTI-777 (25000 имп / мин / мкл) и 99m TC-альбумин (200 мкл каждого). . После методов истощения капилляров высокое соотношение мозг / сыворотка радиоактивно меченного 3 H-PTI-777 присутствовало в паренхиме и коре головного мозга с минимальными количествами в капиллярной фракции (фиг. 9e). В течение 2 минут после введения 3 H-PTI-777 (в соответствии с методами истощения капилляров) был обнаружен в паренхиме и коре головного мозга и сохранялся в ткани мозга после 5, 10 и 20 минут введения (рис.9д). Эти данные продемонстрировали, что PTI-777 может преодолевать гематоэнцефалический барьер и проникать в паренхиму мозга даже в течение 2 минут после того, как он находится в крови.

Заметное снижение нагрузки на бляшки головного мозга под действием PTI-777 в течение 30 дней после периферического введения

PTI-777 (25 мг / кг) или физиологический раствор вводили внутрибрюшинно ежедневно в течение 30 дней 6-месячным трансгенным мышам TASD-41. После 30-дневного лечения результаты показали, что лечение PTI-777 вызывало значительный (p <0,01) 33.Снижение% амилоидной нагрузки Aβ на 2% и значительное (p <0,001) уменьшение количества амилоидных бляшек на 56,6% (на квадратный мм) (фиг. 10). Эти исследования демонстрируют способность основных компонентов Uncaria tomentosa (кошачий коготь) проникать в мозг и заметно снижать нагрузку на бляшки головного мозга в течение 30 дней после периферического введения.

Фигура 10

Заметное снижение нагрузки бляшками головного мозга у трансгенных мышей TASD-41 APP после 30 дней внутрибрюшинных инъекций PTI-777.6-месячным трансгенным мышам TASD-41 APP ежедневно вводили физиологический раствор или PTI-777. В течение 30 дней PTI-777 снизил процентную долю бляшек Aβ на 33,2% (p <0,05) и количество бляшек (на квадратный мм) на 55,6% (p <0,01). ** р <0,05; *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 8 на группу.

Идентификация основных компонентов в составе кошачьего когтя PTI-00703 и PTI-777, ответственных за наблюдаемую активность ингибирования амилоида Aβ

В результате препаративной ВЭЖХ над PTI-777, описанной здесь, было получено 11-13 основных водорастворимых активных фракций, каждая из которых из которых содержали в основном одно основное соединение.Исследования состава и структуры требовали, чтобы основные индивидуальные соединения в каждой фракции были очищены до гомогенности в количестве, достаточном для ЯМР и других спектроскопических исследований (около 30-50 мг для каждого соединения). Хотя каждая из фракций PTI-777 показала значительную активность в анализах in vitro , фракции f, j, h2, h3, k1 и k2 изначально были выделены для начальной окончательной очистки на основе их исходной чистоты, определенной с помощью аналитической ВЭЖХ. , и количество доступного материала.Эти фракции пропускали через колонку препаративной ВЭЖХ до тех пор, пока они не считались чистыми.

Фракция PTI-777 f, идентифицированная как хлорогеновая кислота

Для выделения и идентификации основного соединения во фракции PTI-777 f использовались различные методы. Использовали ВЭЖХ, масс-спектроскопию, ЯМР-спектроскопию ( 1 H-ЯМР и 13 C-ЯМР), корреляционную спектроскопию (COSY) и ультрафиолетовую (УФ) спектроскопию. Как показано в дополнительном материале на рис. S1a, S1b, соединение f фракции PTI-777 было идентифицировано как хлорогеновая кислота (C 16 H 18 O 9 ; MW 354.31) со структурой, показанной на рис. 11а.

Рис. 11

Очистка и идентификация основных компонентов в PTI-777. ( a ) Структура фракции f как хлорогеновая кислота ( b ) Структура фракции j как эпикатехин. ( c ) Структура фракции h3 как эпикатехин-4β-8-эпикатехин (известный как проантоцианидин B2). ( d ) Структура фракции h2 как катехин-4α-8-эпикатехин (известный как проантоцианидин B4). ( e ) Структура фракции k2 как эпикатехин-4β-8-эпикатехин-4β-8-эпикатехин (известный как проантоцианидин C1).( f ) Структура фракции k1 как эпиафзелехин-4β-8-эпикатехин. См. Дополнительные результаты и рисунки для структурных исследований и исследований по идентификации.

PTI-777 фракция j, идентифицированная как эпикатехин

Фракция j была вторым материалом, подлежащим очистке в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры. После выделения и очистки соединения j PTI-777 масс-спектроскопию, ЯМР-спектроскопию, корреляционную спектроскопию (COSY) и УФ-спектроскопию использовали для соединения фракции j и его пентаацетатного производного.Как показано на рис. S2a – S2w дополнительных материалов, соединение j фракции PTI-777 было идентифицировано как эпикатехин (C 15 H 14 O 6 ; MW 290,27) со структурой, показанной на рис. 11b.

PTI-777 фракция h3, идентифицированная как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (специфический димер эпикатехина, известный как проантоцианидин B2).

Фракция h3 была третьим материалом, очищенным в количестве, достаточном для работы по структурному выяснению. После выделения и очистки соединения h3 PTI-777 были проведены ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов, ЯМР-спектроскопия ( 1 H ЯМР и 13 C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY) и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия. все б / у.Главный компонент фракции h из экстракта PTI-777 также был основным компонентом в Uncaria tomentosa (кошачий коготь), ответственной за ингибирующую активность и дезагрегацию Aβ (бляшки) и тау-белка (клубок) (см. Фиг. 6а). Как показано в дополнительном материале на рис. S3a – S3m, соединение h3 фракции PTI-777 было идентифицировано как эпикатехин-4β-8-эпикатехин, также известный как проантоцианидин B2 (C 30 H 26 O 12 ; MW 577) , со структурой, показанной на рис.11c.

PTI-777 фракция h2, идентифицированная как катехин-4α → 8-эпикатехин (проантоцианидин B4)

Фракция h2 была четвертым материалом, который необходимо очистить в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры. После выделения и очистки PTI-777-соединения h2, ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением ионов -ve. Использовали ЯМР-спектроскопию ( 1 H-ЯМР и 13 C-ЯМР), корреляционную спектроскопию (COSY), спектроскопию с измененным масштабированием с постоянным обратным градиентом детектирования (CIGAR) и ультрафиолетовую (УФ) спектроскопию.Как показано в дополнительном материале на рис. S4a – S4j, соединение h2 фракции PTI-777 было идентифицировано как катехин-4α-8-эпикатехин (рис. 11d), также известный как проантоцианидин B4 (C 30 H 26 O 12 ; МВт 577).

PTI-777 фракция k2, идентифицированная как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин или проантоцианидин C1

Фракция k2 была пятым материалом, который нужно очистить в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры. После выделения и очистки PTI-777-соединения k2, ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов.Использовались ЯМР-спектроскопия (-1 H ЯМР и 13 C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY), постоянная временная спектроскопия с измененным масштабированием с обратным градиентом детектирования (CIGAR) и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия. Как показано в дополнительном материале на рис. S5a – S5j, соединение k2 фракции PTI-777 было идентифицировано как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (рис. 11e), также известный как проантоцианидин C1 (C 45 H 38 O 18 ; MW 866).

PTI-777 фракция k1, идентифицированная как эпиафзелехин-4β → 8-эпикатехин

Фракция k1 была шестым материалом, подлежащим очистке в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры.После выделения и очистки соединения PTI-777 k1, ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов, ЯМР-спектроскопия ( 1 H ЯМР и 13 C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY), постоянное время, обратное определение градиента аккордеона Использовались измененная (CIGAR) спектроскопия и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия. Как показано в дополнительном материале на рис. S6a – S6j, соединение k1 фракции PTI-777 было идентифицировано как эпиафзелехин-4β → 8-эпикатехин (рис. 11f) (C 30 H 26 O 11 ; MW 562).

Фракция 1 PTI-777, идентифицированная как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (тетрамер эпикатехина)

Фракция l была седьмым материалом, очищенным в количестве, достаточном для структурной разъяснительная работа. После выделения и очистки соединения PTI-777 1, ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов, ЯМР-спектроскопия ( 1 H ЯМР и 13 C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY), постоянное время, обратное определение градиента аккордеона Использовались измененная (CIGAR) спектроскопия и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия.Как показано в дополнительном материале на рис. S7a, соединение фракции l PTI-777 было идентифицировано эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (тетрамер эпикатехина) (C 80 H 50 O 24 ; MW 1153).

PTI-00703 Проантоцианидины кошачьего когтя являются мощными дезагрегаторами / восстановителями фибрилл Aβ 1–42

В следующем исследовании с помощью флуорометрии тиофлавина Т было определено влияние соединений h3, f, k1, k2 и митрафиллина (основного алкалоида в кошачьем когте) о разборке / дезагрегации предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. В этом исследовании 25 мкМ предварительно фибриллированного Aβ 1–42 инкубировали при 37 ° C в течение 1 недели отдельно или в присутствии соединения h3, f, k1, k2 и митрафиллина при массовых отношениях Aβ: тестируемое соединение 1: 1. ; 1: 0,1; 1: 0,01; 1: 0,001 и 1: 0,0001. Результаты инкубации на 7 день представлены на фиг. 12a, но аналогичные результаты наблюдались уже через 3 дня (не показаны). Как показано на фиг. 12a, в то время как митрафиллин, алкалоид кошачьего когтя, не вызывал значительного разрушения фибрилл Aβ 1–42 при всех испытанных концентрациях, соединение h3 (эпикатехин-4β → 8-эпикатехин; проантоцианидин B2) вызывало дозозависимое нарушение / уменьшение предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42, со значительной (p <0.001) 94% снижение при использовании при соотношении масс / масс Aβ: h3 1: 1 и значительное (p <0,01) снижение на 63% при использовании при соотношении масс / масс Aβ: h3 1: 0,1 (~ 1 : 1 молярное соотношение). Аналогичным образом, соединение f (хлорогеновая кислота), соединение k2 (тример эпикатехина; проантоцианидин C1) и соединение k1 (эпиафзелехин -4β → 8-эпикатехин) вызвали заметное разрушение / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 при использовании при 1: Соотношение мас. / Мас. 1 (рис. 12а). Наиболее эффективным из них, протестированным для разборки / дезагрегации фибрилл Aβ 1–42, было соединение h3 (эпикатехин-4β → 8-эпикатехин; проантоцианидин B2).

Рисунок 12

PTI-00703 Проантоцианидины кошачьего когтя являются мощными разрушителями фибрилл Aβ 1–42. ( a ) Разрушение / разборка фибрилл Aβ 1-42 специфическими проантоцианидинами кошачьего когтя PTI-00703. Соединение h3 (эпикатехин-4β → 8-эпикатехин; проантоцианидин B2) вызывало дозозависимое разрушение / дезагрегацию предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. Аналогичным образом, соединение f (хлорогеновая кислота), соединение k1 (тример эпикатехина; проантоцианидин C1) и соединение k2 (эпифзеледин-4β-8-эпикатехин) вызывало заметное разрушение / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 при использовании при 1: Соотношение 1 вес / вес.Основной алкалоид кошачьего когтя митрафиллин оказался совершенно неэффективным. ** p <0,01, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 5. ( b , c ) Разрушение / дезагрегация предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 и 1–40 эпикатехин-4β-8-эпикатехином (то есть проантоцианидином B2; соединение h3) по данным спектроскопии КД .

PTI-00703 проантоцианидин B2 кошачьего когтя (эпикатехин-4β-8-эпикатехин) является мощным дезагрегатором / восстановителем предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 и Aβ 1–40, как показывает спектроскопия кругового дихроизма

Круговой дихроизм (CD ) спектроскопия определила эффекты тестируемых соединений по разрушению / уменьшению предварительно сформированных амилоидных фибрилл.В одном исследовании КД-спектроскопия определила эффекты чистого соединения h3 (т.е. эпикатехин-4β-8-эпикатехин) на разрушение вторичной структуры β-складчатых листов предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–40 или Aβ 1–42. Как показано на фиг. 12b, только Aβ 1–42 в 10% буфере TFE показал типичные спектры КД амилоидного белка со значительной β-структурой, о чем свидетельствуют резкие минимумы, наблюдаемые при 218 нм. Однако в присутствии соединения h3 (т.е. эпикатехин-4β-8-эпикатехин; проантоцианидин B2) в молярном соотношении 1: 1 заметное нарушение структуры β-слоев в фибриллах Aβ 1–42 было очевидным, как показано сглаживание минимумов, наблюдаемых при 218 нм (по сравнению с одним Aβ 1–42) (рис.12б). Это наблюдали как через 3 дня (не показаны), так и через 7 дней (фиг. 12b) после совместной инкубации фибрилл Aβ 1–42 с соединением h3. Это исследование ясно продемонстрировало, что соединение h3 (эпикатехин-4β-8-эпикатехин; проантоцианидин B2) обладало способностью разрушать / разбирать вторичную структуру бета-складчатого листа, характерную для фибрилл Aβ 1–42.

Как показано на фиг. 12c, только Aβ 1-40 в 10% буфере TFE PBS также показал типичные спектры КД амилоидного белка со значительной структурой β-пластин, что продемонстрировано резкими минимумами при 218 нм.Однако в присутствии соединения h3 (при молярном соотношении 1: 1) был очевиден почти полный разрыв / разборка β-листовой структуры в фибриллах Aβ 1-40 (со значительным увеличением случайного клубка или α-спирали). как показано полным сглаживанием минимумов, наблюдаемых при 218 нм (рис. 12c). Это наблюдалось как через 3 дня (фиг. 12c), так и через 7 дней (не показано) после совместной инкубации фибрилл Aβ 1-40 с соединением h3. Это исследование ясно продемонстрировало, что проантоцианидин B2 (т.е. соединение h3) также разрушает / разбирает бета-складчатую вторичную структуру фибрилл Aβ 1-40.

Проантоцианидин B2 (эпикатехин-4β-8-эпикатехин; соединение h3) снижает нагрузку на бляшки головного мозга и улучшает память в модели трансгенных мышей, «продуцирующих бляшки»

Как показано на рис. 13, уровни Aβ в мозге (т. Е. В коре) 42 и уровни растворимых и нерастворимых Aβ 40 у более молодых 4-месячных трансгенных мышей TASD-41 APP были значительно (p <0,01) снижены после введения проантоцианидина B2 (соединение h3; эпикатехин-4β-8-эпикатехин) в дозе 50 мг / кг. / день после 90 дней лечения (т.е. 7 месяцев при умерщвлении), как определено с помощью ELISA для Aβ 1–42 и 1–40. Обработка проантоцианидином B2 значительно (p <0,05) снижала уровни нерастворимых Aβ 42 и Aβ 40 в головном мозге на 18,5% (фиг. 13a) и 23,9% (фиг. 13b), соответственно. Обработка проантоцианидином B2 также значительно (p <0,01) снизила уровни растворимых Aβ 42 и Aβ 40 на 70,4% (фиг. 13c) и 58,9% (фиг. 13d), соответственно.

Рисунок 13

Снижение нагрузки на бляшки головного мозга у более молодых ( a – h ) и более старых ( i – j ) трансгенных мышей TASD-41 APP с помощью проантоцианидина B2 (соединение h3).( a – h ) Снижение нагрузки Aβ 1–42 и Aβ 1–40 в головном мозге проантоцианидином B2 (т.е. соединением h3) у более молодых (4 месяца в начале; 7 месяцев при умерщвлении) трансгенных мышей APP. n = 10 на группу. ( a ) проантоцианидин B2 вызывал значительное (p <0,05) 18,5% снижение нерастворимого Aβ 1–42 и ( c ) значительное (p <0,05) 70,4% снижение растворимого Aβ 1–42, как определено. с помощью Aβ ELISA. ( b ) Соединение h3 также вызывает значительное снижение нерастворимого Aβ 1-40 на 23,9%, а ( d ) значительное уменьшение 58. Снижение на 9% растворимого Aβ 1–40 в мозге трансгенных мышей TASD-41. n = 4 на группу. ( e – h ) Снижение амилоидной нагрузки в головном мозге и количества бляшек с помощью проантоцианидина B2 у более молодых (4 месяца в начале; 7 месяцев при умерщвлении) трансгенных мышей TASD-41. n = 10 на группу. ( e ) Анализ изображений срезов коры, окрашенных тиофлавином-S, показал, что проантоцианидин B2 (обработка h3) вызывал значительное снижение амилоидной нагрузки тиофлавином S на 74,2% и ( f ) значительное снижение на 74.Снижение количества налета на 9% (на квадратный мм). Точно так же окрашивание конго красным показало значительную 82,9% -ную нагрузку амилоида ( г ) и снижение количества бляшек на 80,8% ( ч ). Окрашенные тиофлавином S срезы коры более старых трансгенных мышей TASD-41 APP (в возрасте 6 месяцев вначале; 9 месяцев в момент умерщвления) показали, что проантоцианидин B2 вызывал значительное снижение амилоидной нагрузки тиофлавином S ( i ) на 58,2%, и значительное снижение количества налета на 51,9% ( j ). * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM.

Как показано на рис. 13e, количественный анализ изображений срезов, окрашенных тиофлавином-S, из коры более молодых трансгенных мышей TASD-41 APP (т. Е. В возрасте 4 месяцев до начала; 7 месяцев при умерщвлении) показал, что обработка проантоцианидином B2 вызывала значительное (p <0,001) снижение на 74,2% амилоидной нагрузки тиофлавина-S (рис. 13e) и значительное (p <0,001) уменьшение количества бляшек на 74,9% (рис.13f) по сравнению с мышами APP, получавшими физиологический раствор. Количественный анализ изображений срезов, окрашенных конго красным, показал, что проантоцианидин B2 также вызывал значительное (p <0,001) 82,9% снижение количества амилоидов, окрашенных конго красным (рис. 13g), и значительное (p <0,001) 80,8% уменьшение количества бляшек ( Фиг. 13h) по сравнению с мышами APP, получавшими физиологический раствор.

Аналогичное снижение амилоидной нагрузки в головном мозге и количества бляшек было также обнаружено через 90 дней периферической обработки проантоцианидином B2 у более старых (9 месяцев при умерщвлении) трансгенных мышей TASD-41 APP. В этом последнем исследовании животные, получавшие проантоцианидин B2, показали значительное (p <0,001) снижение нагрузки бета-амилоидным белком на 58,2% (по оценке с использованием антитела Aβ 6E10) (рис. 13i) и значительное (p <0,001) 51,9. % уменьшение количества бляшек (фиг. 13j) по сравнению с мышами, получавшими физиологический раствор.

Примеры 2 трансгенных мышей TASD-41 APP, обработанных физиологическим раствором в течение 90 дней и окрашенных на наличие амилоидных бляшек в коре головного мозга с использованием тиофлавина S, показаны на фиг. 14a (a, b, обработка физиологическим раствором). Обработка проантоцианидином B2 (обработанная h3) вызвала заметное снижение амилоидной нагрузки мозга / количества бляшек в коре головного мозга, как показано на двух разных мышах TASD-41 APP с использованием флуоресценции тиофлавина S (рис.14a, h3, как показано в c и d).

Рисунок 14

Улучшение памяти и уменьшение воспаления (астроцитоза и микроглиоза) с помощью проантоцианидина B2. ( a ) Пример уменьшения окрашенных тиофлавином-S бляшек в коре головного мозга 2 обработанных физиологическим раствором трансгенных мышей TASD-41 (рис. A, верхние панели) по сравнению с двумя проантоцианидином B2 (т.е. трансгенных мышей TASD-41, обработанных h3 ( Рис. A, нижние панели) Масштабная шкала = 50 мкм. ( b ) Тестирование в водном лабиринте Морриса продемонстрировало, что обработка проантоцианидином B2 (Tg / h3) заметно и достоверно (p <0.001) улучшили кратковременную память на 57,8% по сравнению с животными, получавшими физиологический раствор (Tg / физиологический раствор), как показано на 4-й день невидимой платформы. Аналогичное снижение наблюдалось на 5-й день невидимой платформы после обработки процианидином B2. p <0,001 по t-критерию Стьюдента и ANOVA. n = 12 на группу. ( c ) Проантоцианидин B2 был мощным редуктором астроцитоза у трансгенных животных TASD-41, что продемонстрировано значительным (p <0,001) 69% снижением астроцитоза (то есть срезов мозга, иммуноокрашенных GFAP). Шкала шкалы = 50 мкм. ( d ) Иммуноокрашивание MHC-II и анализ изображений также показали, что обработка проантоцианидином B2 (достоверно p <0,001) уменьшала иммуноокрашивание MHC-II (т.е. микроглиоз) на 80,3%. *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM.

Через 90 дней ежедневного i.p. инъекции (50 мг / кг / день) физиологического раствора (Tg / физиологический раствор) или проантоцианидина h3 (Tg / h3), трансгенных мышей TASD-41 APP и нетрансгенных контрольных однопометников (Non-Tg) тестировали в водном лабиринте Морриса. для определения влияния на гиппокамп-зависимую память (т.е. пространственное приобретение). Обработка проантоцианидином h3 вызвала заметное улучшение гиппокампа-зависимой памяти (на 57,8% на 4 день невидимой платформы; рис. 14b) и на 57,3% на 5 день невидимой платформы (не показано). Это было обнаружено как по длине пути (расстояние в метрах) (рис. 14b), так и по задержке (м / с) (не показано). Таким образом, изменений в скорости плавания (м / сек) между всеми группами не обнаружено. У мышей TASD-41 APP, обработанных проантоцианидином B2, наблюдалось заметное улучшение кратковременной памяти, приближающееся к уровням, наблюдаемым у нетрансгенных животных (Non-Tg) (рис.14б). В последний день обучения все группы обнаружили видимую платформу, демонстрирующую отсутствие двигательных аномалий у всех животных. Это исследование подтвердило, что основной компонент кошачьего когтя PTI-00703, проантоцианидин В2, был мощным редуктором амилоидных «бляшек» мозга, что совпало с заметным улучшением кратковременной памяти.

Главный компонент кошачьего когтя PTI-00703 (проантоцианидин B2) является мощным редуктором как астроцитоза головного мозга, так и микроглиоза.

Как иммуноокрашивание GFAP (для астроцитов), так и иммуноокрашивание MHC-II (для микроглии) из обработанных солевым раствором цианидов по сравнению с проантоцитами B2. Трансгенных мышей, получавших АРР, количественно оценивали с использованием программы анализа изображений.Как показано на фиг. 14c, обработка проантоцианидином B2 (обработка h3) вызвала значительное снижение астроцитоза, что продемонстрировано заметным уменьшением срезов мозга, окрашенных иммуноокрашенным GFAP. Количественный анализ изображений показал, что соединение h3 вызывает значительное (p <0,001) 69,0% снижение астроцитоза. Как показано на фиг. 14d, обработка проантоцианидином B2 также вызвала значительное (p <0,001) 80,3% снижение микроглиоза, на что указывает заметное снижение иммуноокрашивания MHC-II в срезах мозга.Эти исследования дополнительно подтвердили сильную противовоспалительную активность проантоцианидина B2 за счет значительного снижения как астроцитоза мозга, так и микроглиоза у трансгенных мышей TASD-41 APP. Ранее было показано, что кошачий коготь является сильным противовоспалительным средством 39,40 .

36 лучших подписей к котам в Instagram

Люди, которые любят кошек на самом деле любят их, а люди, которые не любят кошек на самом деле , не любят их – промежуточного нет. Какими бы разногласными ни были эти существа, каждый любитель кошек понимает, почему из них получаются такие удивительные питомцы.Тем не менее, не всегда легко выразить словами, почему ты так одержим своим четвероногим пушистым комом. (В конце концов, кошки – это загадочные существа!) Поскольку кошачьи не имеют такой же репутации, как другие повсеместно обожаемые животные (мы смотрим на вас, собаки), важно хорошо их представлять. Как лучше всего это сделать? Очевидно, с очаровательной публикацией вашей кошки в Instagram.

Этот контент импортирован из {embed-name}. Вы можете найти тот же контент в другом формате или найти дополнительную информацию на их веб-сайте.

Во-первых, сделайте видео, на котором мурлычет ваш сонный котенок, или сделайте снимок своего сумасшедшего кота, выполняющего воздушные трюки. Кто мог устоять перед таким милым или забавным ?! После того, как вы сделали идеальное фото или Бумеранг, самое время придумать подпись. Не поддавайтесь желанию написать целый абзац о том, почему ваша кошка – величайшее живое существо, украшающее планету (они это знают, и вы это знаете, и этого достаточно). Вместо этого используйте забавную шутку о кошках или милую цитату, которая покажет, как сильно вы любите своего котенка.Доверьтесь нам, ваши подписчики будут вам благодарны. Ниже вы найдете лучшие подписи к кошкам в Instagram, которые можно использовать, чтобы показать своего любимого животного из семейства кошачьих!

Getty

  • Все, что вам нужно, это любовь и кот.
  • Не у всех ангелов есть крылья. Иногда у них есть усы.
  • Спасибо за воспоминания.
  • Дорога к моему сердцу вымощена отпечатками лап.
  • Ты кошачье мяуканье.
  • Любовь – это четвероногое слово.
  • С котом рядом с тобой все возможно.
  • Я люблю тебя, мяу и фуверь.
  • Кошки – это не вся наша жизнь, но они делают нашу жизнь полноценной.
  • Вы заставили меня мяу.
  • Я хочу провести все девять жизней вместе.
  • Дом там, где кошка.
  • Если на небесах нет кошек, я не хочу туда идти.
  • Для меня ты мурлыкаешь.
  • Я пораженный котенок.
  • Я люблю тебя больше, чем кошачью мяту.

    Смешные подписи к котам

    Getty

    • Выглядит хорошо, кошачий лучше.
    • У меня проблема с кошачьем.
    • Чем больше людей встречаю, тем больше я люблю свою кошку.
    • Кошачья шерсть, пофиг.
    • Да, я сумасшедшая кошатница. В чем твоя точка зрения?
    • Кот отвечает, я плачу за квартиру.
    • Извините, я опоздал. Моя кошка сидела на мне.
    • Все посетители должны быть одобрены котом.
    • Я кот даже.
    • Она пришла, она мурлыкала, она победила.
    • Ты мне котенок?
    • Мальчики? Что бы ни.Кошки? Навсегда.

      Цитаты кошек для подписей в Instagram

      Getty

      • «Какой подарок больше кошачьей любви». – Чарльз Диккенс
      • «Есть два средства защиты от жизненных невзгод: музыка и кошки». – Альберт Швейцер
      • «Невозможно сохранять невозмутимое выражение лица в присутствии одного или нескольких котят». – Синтия Е. Варнадо
      • «Ни один дом не обходится без стука лапок котенка.”- Неизвестно
      • ” Как известно каждому владельцу кошек, никто не владеет кошкой. “- Эллен Перри Беркли
      • ” Если бы кошки могли говорить, они не стали бы. “- Нэн Портер
      • ” В жизни есть несколько вещей более трогательных. чем быть встреченным кошкой ». – Тай Хохофф
      • « Люди, которые не любят кошек, вероятно, были мышами в более ранней жизни ». – Неизвестно
            Келли О’Салливан Главный редактор Келли О’Салливан является старшим редактором журнала The Pioneer Woman и управляет социальными каналами веб-сайта, а также курирует контент-стратегию и новости.

            Этот контент создается и поддерживается третьей стороной и импортируется на эту страницу, чтобы помочь пользователям указать свои адреса электронной почты. Вы можете найти дополнительную информацию об этом и подобном контенте на сайте piano.io.

            Токсичны ли растения Pothos для кошек?

            Растение потос, также известное под названиями золотой потос, дьявольский плющ таро и плющ арум, довольно ядовито для кошек. Листья и стебли потоса содержат кристаллы оксалата кальция.Такие минералы опасны для кошек, если они откусили растение. Эти кристаллы проникают в мягкие ткани рта, горла и желудка кошек. Таким образом, растения Pothos и кошки представляют собой ядовитую комбинацию.

            Опасность растений Pothos заставляет владельцев домашних животных быть особенно осторожными с кошками, когда они находятся рядом с разными видами растений. Несмотря на то, что кошки выздоравливают за короткое время после надлежащего лечения, воздействие вируса весьма пагубно сказывается на их здоровье.Сразу после жевания растения у кошек появляются симптомы заражения, вызванного растением. Раздражение полости рта – одно из самых ярких. При чрезмерном контакте бесцветное растение вызывает у человека раздражение, что отражается на его токсичности.

            Токсичен ли Pothos для кошек?

            Эти растения вызывают у кошек моментальный дискомфорт. Когда кошки съедают ядовитые растения, у них возникает ощущение жжения во рту. Чтобы избавиться от этого ощущения, кошки склонны пускать слюни, рвать или лапать себе рот.Несмотря на сильное раздражение, инфекция также сопровождается мучительной болью. Таким образом, первое, что нужно сделать после того, как кошки пережевывают растение, – это показать их ветеринару.

            Симптомы

            Симптомы интоксикации растением проявляются у кошек сразу после того, как они съели это растение. Если вы подозреваете, что ваша кошка жевала растение, но хотите успокоиться, обратите внимание на следующие симптомы.

            ● Видимая боль в полости рта

            ● Тесание рта

            ● Сильное слюнотечение

            ● Аппетита меньше или нет

            ● Рвота

            ● Дискомфорт при глотании

            Причины

            Когда кошки кусают, жуют или съедают золотистый горшок, начинается процесс отравления.Это происходит из-за наличия в растении нерастворимых рафидов. Кристаллы оксалата кальция вызывают инфекцию кошек растений Pothos. Все кристаллы попадают в пасть кошек, когда они кусают свои листья или стебли.

            Проходя через рот, горло и желудок, кристаллы проникают в мягкие ткани. Это в дальнейшем вызывает отек тканей. Это внутреннее воспаление не только вызывает дискомфорт, но и вызывает у кошек сильную боль. Это побуждает их проявлять явные симптомы.Кошки также начинают испытывать жжение в теле из-за токсина, содержащегося в растении.

            Диагностика

            Если вы заметили, что ваша кошка жует растение или вы наблюдаете у нее вышеупомянутые симптомы, вам следует срочно отвезти питомца к ветеринару. Сбор образца растения или фотографирование растения, которое жевала кошка, действительно важны в процессе диагностики.

            Симптомы кошки должны быть точно описаны ветеринару, так как это поможет ему определить состояние кошки Pothos.Поскольку у ветеринара нет метода определения причины, предоставленная вами информация играет важную роль.

            Обследование началось с полости рта кошки. Если ветеринар обнаружит присутствие кристаллов оксалата кальция во рту кошки, причина будет легко установлена. Это ярко укажет на употребление в пищу ядовитого растения. Тем не менее, эта идентификация не подтверждает употребление в пищу растений потоса, поскольку есть и другие растения, содержащие такие же токсины.

            Моя кошка съела лист потоса. Что делать?

            Если ваша кошка съела хотя бы кусочек горшечного растения, и вы заметили связанные с этим симптомы, вам следует как можно скорее посетить ветеринара.После правильной диагностики состояния кошки ветеринар приступит к лечению. Во-первых, они попытаются взять под контроль симптомы растения Pothos, сделав кошку удобной. Это потребует усилий, чтобы уменьшить боль, испытываемую кошкой.

            Дискомфорт устраняется тщательным промыванием рта кошки с последующим промыванием желудка, подразумевающим промывание желудка. Ветеринар может также кормить кошку молочными продуктами, такими как сыр и йогурт, которые, как известно, эффективно снимают боль.Чтобы предотвратить отек дыхательных путей кошки, что приведет к большим осложнениям, кошке можно дать Бенадрил.

            Одновременно рвоту можно остановить с помощью капектолина или сукральфата, которые, как известно, снимают раздражение слизистой оболочки желудка. В случае сильной рвоты увеличивается вероятность обезвоживания. Это достигается путем в / в введения жидкости кошке.

            После лечения и отдыха кошка обязательно почувствует себя лучше.Процесс выздоровления несложный, хотя диета кошки потребует внимания в ближайшие несколько дней. Также следует предпринять профилактические меры, предусматривающие удаление всех ядовитых растений после консультации с ветеринаром. Следует следить за тем, чтобы кошки не бродили по окрестностям, где потенциально могут быть ядовитые растения.

            Эта статья является гостевым вкладом Гэри Стивена, автора mygardenplant.com

            Одуванчик и кошачье ухо | Определите, что завод

            Для сравнения растений мы рассмотрим одуванчик (который известен большинству людей) и кошачье ухо (похожее на вид растение).Начиная с этого изображения пышного одуванчика ( Taraxacum officinale ), мы видим множество цветочных головок и множество новых формирующихся головок, а также некоторые закрытые головки, которые недавно распустились. Одуванчик может быть почти вечнозеленым растением, поскольку кажется, что он растет круглый год – по крайней мере, когда температура остается выше нуля. Давайте пройдемся по жизненному циклу одуванчика, а затем посмотрим на сходства и различия кошачьих ушей.

            Цветочная головка одуванчика начинает развиваться низко в центре розетки листьев.

            Постепенно стебель, поддерживающий новую цветочную головку, удлиняется, пока не поднимется намного выше основной розетки.

            Полый стебель одуванчика при поломке источает молочно-белое вещество (разновидность латекса). После того, как цветочная головка распустилась, она смыкается сама по себе. . .

            . . . превращает эти оплодотворенные завязи в семена с крыльями. . .

            . . . и вновь открывается, создавая знакомую семенную головку, которая снова поднимается высоко над прикорневой розеткой листьев.

            Обратите внимание на мясистый стебель, поддерживающий семенную головку. Вот голова с симметричным расположением крылатых семян поближе.

            После того, как все семена рассеялись, остается только сосуд для головы. У него тоже прекрасный узор.

            Вот последний вид растения одуванчик. Вы можете видеть, что большинство его цветов превратилось в семена и / или отправили новые семена в путь – к раздражению людей, которые хотят идеальные газоны, и к восторгу травников и собирателей диких кормов.

            Кошачье ухо ( Hypochoeris radicata ) на первый взгляд очень похоже на одуванчик, особенно когда вы видите участок, полный растений.

            Давайте посмотрим на это растение повнимательнее. Вот его цветочная головка. . .

            . . . который изолированно выглядит как цветочная головка одуванчика. Однако обратите внимание на его более жилистый стебель на фото выше и на следующем фото.

            На фотографии выше вы можете увидеть развивающуюся цветочную головку. Эта цветочная головка похожа на цветочную головку одуванчика и, тем не менее, отличается от нее.Разница небольшая.

            Когда мы отойдем в сторону и посмотрим на все растение с кошачьими ушками, мы увидим, как его цветочные головки поднимаются на стеблях над прикорневой розеткой листьев.

            Хотя часто одна цветочная головка растет на одном стебле (например, одуванчик), с такой же вероятностью цветочные головки кошачьих ушей появятся на разветвленном стебле. В отличие от этого, единственная цветочная головка одуванчика появляется сама по себе только на неразветвленном стебле. На этой следующей фотографии наряду с разветвленными стеблями показаны жесткие стебли и разные неоткрытые цветочные головки.

            После того, как цветочные головки распустились и стали семенами, головки снова открываются и распространяют свои крылатые семена – точно так же, как одуванчик.

            Вот вид на прикорневую розетку растения “Кошачий ухо”.

            И вот здесь мы наконец можем увидеть некоторые отличительные особенности одуванчика и кошачьего уха. Листья у кошачьих ушей довольно пушистые, а листья одуванчика гладкие. Если вы внимательно посмотрите на форму листьев – поместив их рядом, – вы увидите, что одуванчик определенно остро зубчатый, а его зубы направлены назад к центру растения.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *